Integrin α8/ITGA8 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402020-ACT

ITGA8はインテグリンα8をコードしており、これはβ1とヘテロ二量体を形成して、ラミニンおよび細胞外マトリックス（ECM）に結合する受容体として機能し、細胞―マトリックス接着、細胞骨格の組織化、メカノトランスダクションを制御します。インテグリンα8／ITGA8はフォーカルアドヒージョンのシグナル伝達と、FAK/SRC、RhoファミリーGTPアーゼ、MAPKなどが関与する下流経路に寄与し、細胞移動、分化、組織リモデリングを協調的に制御します。腎発生や線維芽細胞の生物学など、間葉系・ストローマ系の文脈で盛んに研究されており、インテグリンを介したシグナルの変化はECM沈着や器官形成（形態形成）に影響し得ます。ITGA8発現やインテグリンシグナルの破綻は線維化表現型や腫瘍微小環境のリモデリングと関連づけられており、浸潤、接着依存的な生存、マトリックス駆動性の転写プログラムの研究において重要です。

Integrin α8/ITGA8 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ITGA8の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Integrin α8/ITGA8 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ITGA8 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はITGA8転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Integrin α8/ITGA8の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のITGA8遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるIntegrin α8/ITGA8依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびITGA8発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるIntegrin α8/ITGA8経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。