Integrin β6/ITGB6 Double Nickaseプラスミド (m): sc-421178-NIC

マウス Itgb6 はインテグリンβ6をコードしており、これはαvと会合して、上皮に限局して発現するαvβ6インテグリンを形成するβサブユニットである。αvβ6は、細胞—細胞外マトリックス接着とメカノトランスダクションの主要な仲介因子として機能する。αvβ6はフィブロネクチンや潜在化関連ペプチド（LAP）などのRGD配列を含むリガンドに結合し、潜在型TGF-βの活性化を促進するとともに、上皮のリモデリング、遊走、分化を制御するフォーカルアドヒージョンキナーゼ（FAK）/Srcシグナル伝達へと連結する。インテグリン依存性シグナルとTGF-β経路とのクロストークを介して、ITGB6は創傷修復プログラム、線維性リモデリング、ならびに複数組織における腫瘍—間質相互作用に影響を与える。そのため、ITGB6の発現や機能の破綻は、炎症に駆動される組織リモデリング、線維化、上皮性がんの進展モデルでしばしば検討対象となる。

Integrin β6/ITGB6 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Itgb6 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Itgb6内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Itgb6の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Itgb6が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。