Integrin α6/ITGA6/CD49f Double Nickaseプラスミド (m): sc-421164-NIC

Itga6はインテグリンα6（ITGA6/CD49f）をコードしており、主にβ1またはβ4とヘテロ二量体を形成してラミニン結合性受容体となり、細胞を基底膜に固定します。ITGA6はフォーカルアドヒージョンおよびヘミデスモソームの形成・維持に関与し、細胞外マトリックスとの結合を、FAK/Src、PI3K–AKT、MAPK経路を介した細胞内シグナル伝達へと連結することで、接着・生存・遊走の制御に寄与します。マウス組織ではインテグリンα6は上皮および幹細胞／前駆細胞コンパートメントに豊富に発現し、発生や組織恒常性の過程において極性やニッチとの相互作用に影響を与えます。ITGA6の発現やシグナル伝達の異常は、細胞—マトリックス接着の変化、浸潤プログラム、炎症性リモデリングといった文脈でしばしば研究されており、疾患の機序解明モデルにおいて重要な分子です。

Integrin α6/ITGA6/CD49f ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Itga6 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Itga6内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Itga6の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Itga6が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。