Integrin β5/ITGB5 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401017-NIC

ITGB5はインテグリンβ5をコードしており、主にインテグリンαVとヘテロ二量体を形成してαVβ5となる膜貫通型の接着受容体です。αVβ5は、細胞外マトリックス（ECM）リガンドとアクチン細胞骨格を結び付けます。この受容体はフォーカルアドヒージョンの形成および双方向性シグナル伝達に関与し、FAK/SRC、PI3K–AKT、MAPKなどの経路を介して、細胞接着、スプレッディング、遊走、機械受容（メカノトランスダクション）を調節します。αVβ5はエンドサイトーシスに伴うシグナル伝達にも寄与し、細胞の文脈によってはTGF-β活性化の動態にも影響を及ぼし得ます。ITGB5の発現異常やインテグリンシグナルの破綻は、複数のがんおよび線維性疾患モデルで観察される侵襲性の変化、血管新生応答、リモデリングプログラムの変容と関連づけられています。

Integrin β5/ITGB5 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ITGB5 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ITGB5内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ITGB5の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ITGB5が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。