Integrin β4/ITGB4/CD104 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400573-NIC

ITGB4 codifica a integrina β4 (CD104), um recetor de adesão transmembranar que se emparelha predominantemente com a integrina α6 para formar α6β4, um componente central dos hemidesmossomas que ligam as células epiteliais à membrana basal através das lamininas. Ao acoplar-se a filamentos intermédios e através de comunicação cruzada com adesões focais e sinalização por fatores de crescimento, o ITGB4 regula a polaridade celular, a organização do citoesqueleto e a migração, com efeitos a jusante em vias dependentes de PI3K–AKT, MAPK e GTPases Rho. A expressão ou localização alterada de ITGB4 está associada a uma integridade epitelial desregulada e a maior comportamento invasivo em vários contextos de carcinoma, e variantes patogénicas estão ligadas a doenças bolhosas que envolvem adesão dermoepidérmica comprometida. Estas características biológicas tornam o ITGB4 um alvo útil para estudar sinalização dependente de adesão, remodelação epitelial e fenótipos impulsionados pela matriz extracelular.

Integrin β4/ITGB4/CD104 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus ITGB4 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de ITGB4. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função ITGB4. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com ITGB4 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.