Integrin β4/ITGB4/CD104 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400573-NIC

ITGB4 はインテグリンβ4（CD104）をコードする遺伝子で、主にインテグリンα6と対を成して α6β4 を形成する膜貫通型の接着受容体です。α6β4 は、ラミニンを介して上皮細胞を基底膜に結び付けるヘミデスモソームの中核構成要素として機能します。中間径フィラメントとの連結や、フォーカルアドヒージョンおよび増殖因子シグナルとのクロストークを通じて、ITGB4 は細胞極性、細胞骨格の構築、遊走を制御し、PI3K–AKT、MAPK、Rho GTPase 依存性経路などの下流シグナルに影響を及ぼします。ITGB4 の発現量や局在の変化は、複数の癌腫において上皮の恒常性の破綻や浸潤性の増大と関連し、病的バリアントは真皮-表皮接着の低下を伴う水疱性疾患とも結び付いています。これらの生物学的特徴により、ITGB4 は接着依存的シグナル、上皮リモデリング、細胞外マトリックス駆動の表現型を研究するうえで有用な標的となります。

Integrin β4/ITGB4/CD104 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ITGB4 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ITGB4内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ITGB4の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ITGB4が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。