Integrin α4/ITGA4/CD49d Double Nickaseプラスミド (m): sc-421162-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Integrin α4/ITGA4/CD49d Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Integrin α4/ITGA4/CD49dダブルニカースプラスミド（m）およびIntegrin α4/ITGA4/CD49dダブルニカースプラスミド（m2）は、Itga4を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: Integrin α4/ITGA4/CD49d 抗体 (B-2): sc-376334
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Integrin α4/ITGA4/CD49d Double Nickaseプラスミド (m) | sc-421162-NIC | 20 µg | $410.00 |
マウスItga4は、インテグリンα4（ITGA4/CD49d）をコードしている。インテグリンα4は接着受容体であり、β1またはβ7と対をなしてVLA-4（α4β1）あるいはα4β7インテグリンを形成し、VCAM1やフィブロネクチンなどの結合パートナーを介して白血球のトラフィッキング、強固な接着、血管内皮通過（トランスミグレーション）を制御する。ITGA4を介したアウトサイドインシグナルは、FAK/SRC、PI3K–AKT、MAPKといったフォーカルアドヒージョンのシグナル結節を含む経路を通じて、細胞骨格リモデリングや生存プログラムを協調的に制御し、細胞外マトリックスへの結合を遺伝子発現および細胞運動性へと結び付ける。免疫・血管生物学においてα4インテグリンは、炎症細胞のリクルート、造血細胞のホーミング、組織特異的な血管外遊走に影響し、これらの過程は自己免疫、神経炎症、腫瘍関連白血球浸潤のモデルでしばしば解析対象となる。ITGA4活性の破綻は、接着ダイナミクスの変化が細胞局在や微小環境とのクロストークを形作る慢性炎症や転移ニッチ形成の文脈でも研究されている。
Integrin α4/ITGA4/CD49d ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Itga4 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Itga4内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Itga4の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Itga4が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。