Integrin β3/ITGB3/CD61 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400216-NIC

ITGB3 codifica a integrina β3 (CD61), um recetor de adesão transmembranar que forma heterodímeros com a integrina αIIb ou αV, originando os complexos αIIbβ3 e αVβ3, que se ligam a ligandos da matriz extracelular e transmitem sinalização bidirecional através da membrana plasmática. Por meio do acoplamento a reguladores das adesões focais e do citoesqueleto, a integrina β3 modula a adesão celular, o espalhamento, a migração e a mecanotransdução, envolvendo vias como FAK/SRC, PI3K–AKT e as GTPases da família Rho. Em plaquetas e megacariócitos, a sinalização via αIIbβ3 é central para a agregação e a formação de trombos, enquanto a αVβ3 contribui para as interações de células endoteliais e tumorais com a matriz. Alterações na expressão ou na função de ITGB3 têm sido associadas a desregulação da hemostase, da biologia vascular, da inflamação e da invasão e metastização associadas ao cancro, tornando-o um nó amplamente estudado em redes de sinalização dependentes de adesão.

Integrin β3/ITGB3/CD61 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus ITGB3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de ITGB3. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função ITGB3. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com ITGB3 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.