Plásmido Doble Nickase (h) Integrin α3/ITGA3/CD49c: sc-400841-NIC

ITGA3 codifica la integrina α3 (CD49c), que se heterodimeriza principalmente con la integrina β1 para formar un receptor de unión a laminina que conecta la matriz extracelular con el citoesqueleto de actina. Este complejo de adhesión regula la dinámica de las adhesiones focales, la polaridad celular y la señalización de fuera hacia dentro mediante vías como FAK/Src, PI3K–AKT y MAPK, influyendo así en la migración, la supervivencia y las interacciones epitelio-mesenquimales. La integrina α3 es importante para la organización de la membrana basal y la integridad del tejido epitelial, y la actividad alterada de ITGA3 se ha asociado con comportamiento celular invasivo, remodelación relacionada con fibrosis y programas desregulados de reparación de heridas. En investigación biomédica, ITGA3 se analiza con frecuencia para desentrañar la comunicación célula–matriz, la mecanotransducción y el tráfico y la morfogénesis dependientes de laminina en modelos epiteliales y del microambiente tumoral.

Integrin α3/ITGA3/CD49c El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ITGA3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ITGA3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ITGA3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ITGA3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.