Integrin α10/ITGA10 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404080-ACT

ITGA10 はインテグリン α10 をコードしており、コラーゲン結合性の α サブユニットとして、通常はインテグリン β1 と対になって細胞表面の接着受容体を形成します。この受容体は、軟骨細胞などの間葉系系譜で豊富に発現します。インテグリン α10 は細胞外マトリックスをアクチン細胞骨格へ連結することで、フォーカルアドヒージョンの形成や、FAK/SRC シグナル伝達、下流の MAPK カスケード、Rho ファミリー GTPase によって制御される細胞骨格ダイナミクスを含むメカノトランスダクション経路を調節します。これらの過程は細胞接着、遊走、細胞外マトリックスのリモデリングに影響するため、ITGA10 は軟骨生物学、骨格発生、ストローマ細胞とマトリックスの相互作用の研究において重要です。また、インテグリンを介した接着やコラーゲンシグナルの変化は、変性関節疾患様の表現型や腫瘍—ストローマ間クロストークの文脈でも頻繁に検討されており、マトリックスとの結合が浸潤や生存に関わるプログラムを形作り得ることが示されています。

Integrin α10/ITGA10 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ITGA10の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Integrin α10/ITGA10 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ITGA10 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はITGA10転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Integrin α10/ITGA10の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のITGA10遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるIntegrin α10/ITGA10依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびITGA10発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるIntegrin α10/ITGA10経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。