Integrin α1/ITGA1/CD49a Double Nickaseプラスミド (m): sc-430957-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Integrin α1/ITGA1/CD49a Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Integrin α1/ITGA1/CD49aダブルニカースプラスミド（m）およびIntegrin α1/ITGA1/CD49aダブルニカースプラスミド（m2）は、Itga1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: Integrin α1/ITGA1/CD49a 抗体 (A-9): sc-271034
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Integrin α1/ITGA1/CD49a Double Nickaseプラスミド (m) | sc-430957-NIC | 20 µg | $410.00 |
Itga1はインテグリンα1（ITGA1/CD49a）をコードしており、β1サブユニットとヘテロ二量体を形成してα1β1型コラーゲン／ラミニン受容体として機能します。これにより、細胞外マトリックス（ECM）への結合が細胞内シグナル伝達および細胞骨格の再構築へと結び付けられます。ITGA1を介した接着は、フォーカルアドヒージョン複合体やFAK/Src、MAPK/ERK、PI3K/AKTといった下流経路を通じて、細胞移動、生存、メカノトランスダクションを制御し、さらに組織構築や炎症細胞とマトリックスの相互作用にも影響します。マウスモデルでは、Itga1機能の変化が、白血球トラフィッキングの異常、線維化に関連するマトリックス再構築の破綻、そして状況依存的な腫瘍細胞の浸潤性や間質生物学の変化と関連することが示されています。これらの役割により、ITGA1は、発生や疾患関連の微小環境におけるECM感知、免疫細胞の滞留、コラーゲン駆動性シグナル伝達を研究するうえで有用な標的となります。
Integrin α1/ITGA1/CD49a ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Itga1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Itga1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Itga1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Itga1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。