Insulin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400149-ACT

ヒトINSはインスリンをコードしており、インスリンは膵β細胞でプレプロインスリンとして合成されるペプチドホルモンです。その後、ER–ゴルジ体の分泌トラフィッキングを経てプロセシングされ、成熟インスリンとCペプチドになります。インスリン受容体への結合によりPI3K–AKTおよびMAPKシグナル伝達が活性化され、肝臓・骨格筋・脂肪組織にわたって、グルコース取り込み、グリコーゲンおよび脂質代謝、さらに広範な同化（アナボリック）プログラムが協調的に制御されます。INS発現、プロインスリンのプロセシング、またはインスリンシグナルの破綻は、グルコース恒常性の障害に寄与し、糖尿病関連の病態生理およびβ細胞ストレス応答の中心的要因となります。INSはまた、膵発生、代謝性炎症、細胞分化のモデルにおいて、内分泌系としてのアイデンティティや刺激—分泌連関の指標マーカーとして広く用いられています。

Insulin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性INSの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Insulin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における INS 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はINS転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Insulinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のINS遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるInsulin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびINS発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるInsulin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。