ING4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403707-ACT

ING4 (membro 4 da família inibidora de crescimento) codifica uma proteína nuclear semelhante a supressora tumoral, que atua como reguladora da transcrição associada à cromatina. A ING4 participa de complexos ligados à acetilação de histonas e influencia programas de expressão gênica que governam o controle do ciclo celular, a apoptose, as respostas a danos no DNA e a senescência celular, com interação documentada com as vias de sinalização de p53 e NF-κB. Ao modular saídas transcricionais inflamatórias e vias responsivas ao estresse, a ING4 ajuda a conter a proliferação aberrante e regula respostas ao estresse genotóxico e oxidativo. Alterações na expressão ou na função de ING4 têm sido associadas a fenótipos oncogênicos e à desregulação da sinalização inflamatória em múltiplos contextos relevantes para o câncer, tornando-a um nó útil para estudos mecanísticos do controle epigenético.

ING4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ING4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ING4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ING4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ING4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ING4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ING4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ING4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ING4 em células tumorais com expressão de ING4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.