INDOL1 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-431618-ACT

マウス Ido2 は、キヌレニン経路においてトリプトファンを N-ホルミルキヌレニンへと酸化的に開裂する、ヘム依存性酵素インドールアミン 2,3-ジオキシゲナーゼ 2（INDOL1）をコードします。INDOL1 は、細胞内トリプトファンの利用可能量を調節し、さらに生理活性をもつキヌレニン代謝産物を産生することで、免疫代謝シグナル伝達、レドックス恒常性、ならびに骨髄系細胞および上皮細胞の文脈における炎症関連遺伝子プログラムに影響を与えます。Ido2 の活性は、関連するトリプトファン分解酵素と併せて、抗原提示、寛容様応答、サイトカインネットワークを形作る機構の中で研究されてきました。キヌレニン経路フラックスの破綻やトリプトファン代謝の変化は、免疫機能障害や炎症関連疾患モデルと関連づけられており、Ido2 は経路解析に有用なノードであることが示唆されます。

INDOL1 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Ido2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

INDOL1 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Ido2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はIdo2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性INDOL1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のIdo2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるINDOL1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびIdo2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるINDOL1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。