IL-7R Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401536-ACT

O IL7R humano codifica a subunidade alfa do receptor de interleucina-7 (IL-7R/CD127), uma subunidade de receptor de citocina que se associa à cadeia γ comum para mediar a sinalização dependente de IL-7, essencial para a timopoiese, a sobrevivência de células T na periferia e a proliferação homeostática. A ligação ao IL-7R ativa JAK1/JAK3 e, a jusante, programas transcricionais mediados por STAT5, com acoplamento adicional às vias PI3K–AKT e MAPK, que moldam o metabolismo e a diferenciação dos linfócitos. A dinâmica de expressão do IL7R ajuda a definir subpopulações linfocitárias e estados de ativação imune, e alterações na regulação ou na sinalização de IL7R têm sido associadas a fenótipos de desregulação imunitária e a estudos de associação genética em autoimunidade e doenças inflamatórias. Como receptor de superfície celular, o IL-7R é frequentemente estudado no contexto de tráfego de receptores, cinética de resposta ao ligante e controlo transcricional do comprometimento de linhagens imunitárias.

IL-7R O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IL7R sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IL-7R O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IL7R em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IL7R, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IL-7R. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IL7R nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IL-7R no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IL-7R em células tumorais com expressão de IL7R silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.