Partículas Lentivirales de Activación (m) IL-4I1: sc-420354-LAC

Il4i1 de ratón codifica IL-4I1, una L‑aminoácido oxidasa secretada que se expresa predominantemente en células presentadoras de antígeno y que modula la homeostasis inmunitaria mediante el catabolismo de aminoácidos y la señalización redox. Al oxidar sustratos como la L‑fenilalanina, IL-4I1 genera peróxido de hidrógeno y metabolitos relacionados que pueden influir en los umbrales de activación de los linfocitos T, los programas de citocinas y la función de las células mieloides dentro de microambientes inflamatorios. La actividad de Il4i1 se entrecruza con vías que controlan la inmunidad adaptativa impulsada por antígenos, las respuestas al estrés oxidativo y la regulación metabólica de estados inmunitarios efectores frente a reguladores. La expresión desregulada de IL-4I1 se ha asociado con alteraciones de la inmunosupresión y de la remodelación inflamatoria en contextos que incluyen infección, autoinmunidad y evasión inmunitaria asociada a tumores, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico en la investigación en inmunometabolismo.

Las partículas de activación lentiviral IL-4I1 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Il4i1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral IL-4I1 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Il4i1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de IL-4I1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Il4i1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.