Plásmido CRISPR de Activación (m) IL-27: sc-434233-ACT

El gen Il27 del ratón codifica IL-27, una citocina heterodimérica de la familia de la IL-12 que señala a través del complejo receptor WSX-1 (IL-27RA)/gp130 para activar las vías JAK/STAT, en particular STAT1 y STAT3. IL-27 modula la comunicación entre las células presentadoras de antígeno y las células T al orientar la diferenciación de los linfocitos T colaboradores CD4+, favoreciendo una programación temprana hacia Th1 mientras limita las respuestas Th17 y promueve programas reguladores asociados a IL-10. A través de estos efectos inmunorreguladores, IL-27 influye en circuitos inflamatorios vinculados a la inmunidad mucosal, la autoinmunidad y la defensa del huésped, y se estudia con frecuencia en el contexto de la inflamación crónica y la remodelación inmunitaria asociada a tumores. Su vía se cruza con redes de señalización tipo interferón y tipo IL-6 que coordinan la producción de citocinas, la expresión de quimiocinas y la función de las células efectoras.

IL-27 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Il27 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

IL-27 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Il27 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Il27, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de IL-27. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Il27 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de IL-27 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía IL-27 en células tumorales con expresión de Il27 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.