IL-22 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403228

Panoramica

IL22 umano codifica l’interleuchina-22 (IL-22), una citochina prodotta prevalentemente da cellule Th17/Th22 e da cellule linfoidi innate, che segnala attraverso il complesso recettoriale IL-22R1/IL-10R2 nei compartimenti epiteliale e stromale. L’IL-22 attiva la segnalazione STAT3 dipendente da JAK1/TYK2 e interagisce con le vie MAPK e PI3K per regolare l’integrità della barriera, l’espressione di peptidi antimicrobici, la produzione di muco e i programmi di riparazione tissutale sulle superfici mucosali. Un’attività di IL-22 disregolata è stata implicata in circuiti infiammatori che collegano le cellule immunitarie agli epiteli in condizioni che interessano cute, polmone e tessuti gastrointestinali, e può modulare l’infiammazione associata al tumore e la proliferazione epiteliale a seconda del contesto. Queste proprietà rendono IL22 un bersaglio utile per analizzare il crosstalk immuno-epiteliale, la biologia delle barriere e le risposte trascrizionali guidate dalle citochine.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO IL-22 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene IL22 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del IL22 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto IL22 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina IL-22.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di IL22 per lo studio della segnalazione di IL-22, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni IL22 critici per la funzione di IL-22
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di IL22 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal IL-22 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal IL-22 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus IL22. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal IL-22 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR IL-22 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia IL22 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio IL22 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.