IL-1Rrp2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-430727-ACT

Il1rl2 codifica o receptor murino IL-1Rrp2, um membro da família de receptores de interleucina-1 que contribui para a detecção de citocinas e para a sinalização inflamatória a jusante. A ativação de complexos de receptores de IL-1 normalmente se conecta a vias dependentes de MyD88 para regular programas transcricionais de NF-κB e MAPK, moldando respostas imunes inatas e adaptativas. A expressão e a sinalização por meio de receptores da família IL-1R influenciam a ativação de leucócitos, as respostas da barreira epitelial e a remodelação tecidual durante a inflamação. A desregulação de redes de sinalização relacionadas à IL-1 é frequentemente estudada em modelos de inflamação alérgica, autoimunidade e infecção, nos quais alterações na responsividade a citocinas podem modular fenótipos de doença.

IL-1Rrp2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Il1rl2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IL-1Rrp2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Il1rl2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Il1rl2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IL-1Rrp2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Il1rl2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IL-1Rrp2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IL-1Rrp2 em células tumorais com expressão de Il1rl2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.