IL-1RII Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421099

Panoramica

Il1r2 codifica il recettore murino dell’interleuchina-1 di tipo II (IL-1RII), un membro atipico della famiglia dei recettori dell’IL-1 che funziona prevalentemente come recettore esca per IL-1α e IL-1β. Legando i ligandi dell’IL-1 senza attivare una segnalazione efficace, IL-1RII limita la disponibilità dei ligandi per IL-1R1 e attenua le cascate infiammatorie a valle che altrimenti attiverebbero programmi trascrizionali dipendenti da NF-κB e MAPK. L’attività di IL-1RII contribuisce a modulare l’attivazione dell’immunità innata, il reclutamento dei leucociti e l’amplificazione della rete citochinica nei compartimenti mieloidi e stromali. Alterazioni dell’espressione o dello shedding di IL-1RII sono state associate a risposte infiammatorie disregolate, rilevanti per l’infiammazione autoimmune, la biologia delle infezioni e i modelli di danno tissutale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO IL-1RII (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Il1r2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Il1r2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Il1r2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina IL-1RII.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Il1r2 per lo studio della segnalazione di IL-1RII, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Il1r2 critici per la funzione di IL-1RII
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Il1r2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal IL-1RII CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal IL-1RII CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Il1r2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal IL-1RII Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR IL-1RII (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Il1r2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Il1r2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.