Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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IL-1RI Double Nickaseプラスミド (m): sc-421098-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- IL-1RI Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- IL-1RIダブルニカースプラスミド（m）およびIL-1RIダブルニカースプラスミド（m2）は、Il1r1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: IL-1RI 抗体 (H-8): sc-393998
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
IL-1RI Double Nickaseプラスミド (m) | sc-421098-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IL-1RI Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-421098-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il1r1 は、細胞表面で自然免疫の活性化を開始するインターロイキン-1αおよびインターロイキン-1βの主要なシグナル伝達受容体であるマウス IL-1RI をコードする。リガンドが結合すると、IL-1受容体アクセサリータンパク質と MyD88 がリクルートされ、シグナル伝達複合体を形成して IRAK–TRAF6 カスケードを駆動し、最終的に NF-κB と MAPK を活性化して、炎症性遺伝子プログラムを広範に誘導する。これらの経路を介して IL-1RI は、多様な細胞種におけるサイトカインおよびケモカイン産生、白血球の動員、発熱反応、組織リモデリングを制御する。IL-1RI シグナルの破綻は、自己炎症、関節炎様の関節病変、神経炎症、代謝性炎症のモデルで関与が示されており、Il1r1 は機序免疫学研究における重要な結節点となっている。
IL-1RI ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Il1r1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Il1r1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Il1r1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Il1r1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。