IL-17RA Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401447-ACT

IL17RA codifica o receptor A da interleucina-17 (IL-17RA), uma subunidade de receptor amplamente expressa que se associa ao IL-17RC para mediar a sinalização por IL-17A e IL-17F e também pode participar em complexos receptores de outras citocinas da família IL-17. A ligação do ligante ativa cascatas dependentes de ACT1/TRAF6 que convergem nas vias NF-κB, MAPK e C/EBP, promovendo a transcrição de quimiocinas, citocinas e efetores antimicrobianos que coordenam o recrutamento de neutrófilos e a imunidade da barreira epitelial. A sinalização via IL-17RA molda programas inflamatórios em superfícies mucosas e estromais e interage com respostas imunitárias inatas e adaptativas, incluindo a biologia mediada por Th17. A desregulação da atividade da via IL-17RA tem sido associada a mecanismos de doenças inflamatórias crónicas e autoimunes e pode influenciar a inflamação associada a tumores e a remodelação tecidular em diversos contextos.

IL-17RA O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IL17RA sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IL-17RA O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IL17RA em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IL17RA, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IL-17RA. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IL17RA nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IL-17RA no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IL-17RA em células tumorais com expressão de IL17RA silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.