IL-12B p40 Plasmide Double Nickase (h): sc-401407-NIC

IL12B codifica la subunità p40 di IL-12B, un componente condiviso delle citochine eterodimeriche IL-12 (p35/p40) e IL-23 (p19/p40), che coordinano le risposte immunitarie innate e adattative. Attraverso la segnalazione dei recettori di IL-12 e IL-23, le citochine contenenti p40 attivano le vie JAK/STAT, promuovono la polarizzazione Th1/Th17 e sostengono programmi antimicrobici guidati da IFN-γ e l’espressione di geni infiammatori. L’espressione di IL12B nelle cellule presentanti l’antigene è strettamente regolata dagli input dei recettori di riconoscimento del patogeno, inclusi i segnali TLR e NF-κB, collegando il riconoscimento microbico alla produzione di citochine. Un’attività deregolata di IL12B è stata implicata nella fisiopatologia dell’infiammazione cronica e delle malattie autoimmuni, nonché in alterazioni della difesa dell’ospite, rendendolo un bersaglio frequente per studi meccanicistici in modelli di immunologia e infiammazione.

IL-12B p40 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus IL12B nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di IL12B. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di IL12B. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con IL12B interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.