IL-1 beta/IL1B Double Nickaseプラスミド (m): sc-421097-NIC

マウス Il1b は、強力な炎症促進性サイトカインであるインターロイキン1β（IL‑1β）をコードする。IL‑1βは主に活性化した骨髄系細胞で産生され、インフラマソーム依存的なカスパーゼ1による切断を経て成熟型へとプロセシングされる。IL‑1βがIL‑1受容体複合体を介してシグナル伝達を行うと、NF‑κBおよびMAPK経路が活性化され、ケモカイン、接着分子、さらに追加のサイトカインの転写が促進され、白血球のリクルートと自然免疫応答の増幅を協調的に制御する。この軸はパイロトーシス、発熱応答、ならびにTNFやIL‑6ネットワークとのクロストークと密接に関連し、組織炎症とリモデリングのあり方を規定する。IL‑1β産生の破綻は、感染、自己免疫／自己炎症性症候群、代謝性炎症、神経炎症過程のマウスモデルにおいて、分子学的な指標（リードアウト）として広く用いられている。

IL-1 beta/IL1B ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Il1b 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Il1b内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Il1bの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Il1bが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。