IKKβ Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400247-ACT

IKBKB codifica a IKKβ (quinase de IκB beta), uma subunidade catalítica do complexo IKK que fosforila proteínas IκB para desencadear sua ubiquitinação e degradação, permitindo que os fatores de transcrição NF-κB se transloquem para o núcleo. Por meio desse ponto central de controle, a IKKβ regula a sinalização imune inata e adaptativa, programas de citocinas inflamatórias, sobrevivência celular e respostas ao estresse a jusante de receptores como TNFR, TLRs e IL-1R. A atividade desregulada de IKBKB/IKKβ está associada à ativação aberrante da via de NF-κB observada em diversas patologias inflamatórias e em múltiplos contextos de câncer, tornando-a um nó comum investigado em estudos de transdução de sinal e de redes transcricionais. Em modelos celulares humanos, a modulação da expressão de IKBKB é frequentemente usada para examinar o crosstalk com a sinalização de MAPK, a apoptose e respostas ao estresse metabólico.

IKKβ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IKBKB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IKKβ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IKBKB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IKBKB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IKKβ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IKBKB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IKKβ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IKKβ em células tumorais com expressão de IKBKB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.