Iglon5 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-431673-ACT

Iglon5（IgLONファミリータンパク質5）は、グリコシルホスファチジルイノシトール（GPI）アンカー型の細胞表面接着分子で、主に神経細胞膜に局在し、神経突起の伸長、シナプスの組織化、細胞間認識に寄与します。IgLON免疫グロブリンスーパーファミリーの一員として、Iglon5は軸索誘導や神経回路網の成熟に関連する過程に関与し、膜マイクロドメインとの連携や細胞外での相互作用を介して回路の結合性を形作ります。Ig/LONファミリーの接着プログラムの破綻は、シナプス安定性の変化や神経炎症シグナルの文脈と関連づけられており、神経変性や睡眠関連の神経学的表現型に関する研究関心を後押ししています。マウス系では、Iglon5は神経発生、シナプス維持、ならびにストレス応答に伴う細胞表面プロテオームの変化との関連で研究されることが一般的です。

IGLON5 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Iglon5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

IGLON5 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Iglon5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はIglon5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性IGLON5の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のIglon5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるIGLON5依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびIglon5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるIGLON5経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。