IGF2R/M6PR CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401697-ACT

IGF2Rは、カチオン非依存性マンノース-6-リン酸受容体（IGF2R/M6PR）をコードしており、M6P標識されたリソソーム加水分解酵素をゴルジ体からエンドソームおよびリソソームへ輸送すると同時に、細胞外リガンドの取り込みとクリアランスも担う、多機能なエンドソーム分別受容体です。インスリン様成長因子2（IGF2）に結合してリガンドの利用可能性を調節することで、IGF2Rは成長因子シグナル伝達ネットワークや細胞増殖プログラムに影響を与えます。IGF2R/M6PRは、リソソーム生合成、エンドソームからゴルジ体へのリサイクリング、ならびに代謝やストレス応答を形作るプロテオスタシス経路にも関与します。IGF2R機能の制御異常または喪失は、リソソーム酵素輸送の変化や異常なIGF2シグナル伝達と関連づけられており、がん生物学、発生生物学、リソソーム機能障害の研究分野でしばしば検討される文脈です。

IGF2R/M6PR CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性IGF2Rの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

IGF2R/M6PR CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における IGF2R 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はIGF2R転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性IGF2R/M6PRの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のIGF2R遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるIGF2R/M6PR依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびIGF2R発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるIGF2R/M6PR経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。