IGF2BP2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404985-ACT

IGF2BP2（IGF2 mRNA結合タンパク質2）は細胞質に存在するRNA結合タンパク質で、m6A修飾を受けた転写産物を認識し、状況依存的にmRNAの局在、安定性、翻訳を制御します。転写後段階の遺伝子発現プログラムを形成することで、IGF2BP2は細胞代謝、増殖、ストレス適応応答に影響を及ぼし、経路関連mRNAの制御を介してPI3K–AKTやMAPKといったシグナル伝達ネットワークの再構築にも関与するとされています。IGF2BP2活性の変化は、代謝形質の個体差や、がんや糖尿病関連の表現型を含む複数の疾患関連モデルで観察される増殖関連の転写出力の破綻と関連づけられています。これらの特性により、IGF2BP2はRNAの運命決定と、それが細胞状態の制御に及ぼす下流作用を解析するための有用な結節点となります。

IGF2BP2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性IGF2BP2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

IGF2BP2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における IGF2BP2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はIGF2BP2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性IGF2BP2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のIGF2BP2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるIGF2BP2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびIGF2BP2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるIGF2BP2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。