IGF-II Double Nickaseプラスミド (h): sc-401015-NIC

ヒトIGF2は、分泌性の成長因子であるインスリン様成長因子II（IGF-II）をコードしており、主にIGF1Rおよびインスリン受容体アイソフォームAを介してシグナルを伝達し、増殖、生存、代謝、分化を制御します。IGF-IIはPI3K–AKT–mTORおよびRAS–RAF–MEK–ERKカスケードを活性化し、発生や組織恒常性の文脈において細胞周期の進行や同化（アナボリック）シグナル伝達に影響を与えます。IGF2はゲノムインプリンティングとエピジェネティック制御の対象であり、IGF-IIの発現またはシグナル伝達の破綻は、複数の腫瘍タイプにおいて成長制御の変化や腫瘍形成性表現型と関連します。これらの特性により、IGF2は成長因子シグナル、発生制御、ならびに状況依存的な細胞増殖応答を解析するための広く用いられる標的（ノード）となっています。

IGF-II ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における IGF2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、IGF2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、IGF2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、IGF2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。