IGF-II Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421058-ACT

O Igf2 de camundongo codifica o fator de crescimento semelhante à insulina II (IGF‑II), um fator de crescimento secretado que sinaliza principalmente por meio do IGF1R e da isoforma A do receptor de insulina para regular o crescimento embrionário e placentário, a proliferação celular, a sobrevivência e a homeostase metabólica. O IGF‑II ativa as vias downstream PI3K–AKT–mTOR e RAS–RAF–MEK–ERK, influenciando a progressão do ciclo celular, programas de diferenciação e a utilização de nutrientes. O Igf2 é um locus imprintado com expressão do desenvolvimento rigidamente controlada, e a desregulação da sinalização de IGF‑II tem sido associada a fenótipos de crescimento anormal, regeneração tecidual alterada e processos oncogênicos em múltiplos contextos. Em modelos murinos, a perturbação de Igf2 é amplamente utilizada para estudar o controle do crescimento, a regulação epigenética do imprinting e o crosstalk de sinalização com os eixos insulina/IGF.

IGF-II O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Igf2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IGF-II O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Igf2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Igf2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IGF-II. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Igf2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IGF-II no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IGF-II em células tumorais com expressão de Igf2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.