IGF-1 Receptor α/β/IGF1R Double Nickaseプラスミド (h): sc-400084-NIC

IGF1Rはインスリン様成長因子1受容体をコードしており、ジスルフィド結合で連結したα/β型の受容体チロシンキナーゼとして、IGFシグナルを細胞内へ伝達し、増殖・生存・代謝・分化を制御する。リガンド結合により受容体の自己リン酸化が促進され、IRS/SHCアダプタータンパク質が介在してPI3K–AKT–mTOR経路およびRAS–RAF–MEK–ERK経路が活性化され、細胞周期の進行や抗アポトーシス応答が協調的に誘導される。IGF1Rの活性はインテグリンシグナルやインスリン/IGF経路のフィードバック制御とも交差し、細胞ストレス応答や同化的な成長プログラムに影響を与える。IGF1Rシグナルの破綻は、腫瘍化、治療抵抗性の機構、ならびに多様な疾患状況における成長制御の異常と関連しており、機序解明研究における経路ノードとしての有用性を裏づけている。

IGF-1 Receptor α/β/IGF1R ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における IGF1R 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、IGF1R内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、IGF1Rの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、IGF1Rが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。