Ig J Chain Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403642-ACT

O JCHAIN humano codifica a cadeia J de imunoglobulina, um pequeno polipeptídeo secretado necessário para a polimerização de IgA e IgM e para a formação de IgA dimérica e IgM pentamérica. A cadeia J de Ig dá suporte à montagem e à estabilidade de anticorpos multiméricos e permite a interação com o receptor de imunoglobulina polimérica (PIGR), promovendo o transporte transepitelial de imunoglobulinas secretórias e a defesa imune das mucosas. Sua expressão está intimamente ligada à diferenciação de células B em plasmócitos secretores de anticorpos e é coordenada com a resposta a proteínas mal dobradas e com programas da via secretória que acomodam a alta produção de imunoglobulinas. A expressão desregulada de JCHAIN é usada como marcador de estados de plasmócitos e é estudada em contextos como imunodeficiência, inflamação crônica e neoplasias de células B/plasmócitos.

Ig J Chain O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de JCHAIN sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Ig J Chain O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus JCHAIN em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição JCHAIN, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Ig J Chain. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus JCHAIN nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Ig J Chain no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Ig J Chain em células tumorais com expressão de JCHAIN silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.