IFT88 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404089-ACT

ヒトIFT88は、一次繊毛の組み立て・維持および軸糸微小管に沿った順行性輸送に必須な、鞭毛内輸送（IFT）複合体Bの中核構成要素をコードする。繊毛タンパク質の取り込みとターンオーバーを可能にすることで、IFT88は繊毛で統合される主要な感覚・発生シグナル伝達経路を支えており、細胞周期制御や分化に影響するHedgehog経路をはじめとする受容体介在性カスケードが含まれる。IFT88依存的な繊毛形成が障害されると、繊毛シグナルの動態と細胞極性が乱れ、これらの過程は組織の形態形成や恒常性に影響する繊毛病（ciliopathy）および関連疾患に広く関与している。繊毛生物学における中心的ノードとして、IFT88は輸送異常とシグナル経路の制御破綻を結び付け、増殖・遊走・上皮組織化の変化といった表現型との関連を解析する目的で頻繁に研究されている。

IFT88 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性IFT88の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

IFT88 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における IFT88 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はIFT88転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性IFT88の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のIFT88遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるIFT88依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびIFT88発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるIFT88経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。