IFN-γ/Interferon gammaCRISPR激活质粒(m): sc-421050-ACT

小鼠 Ifng 基因编码干扰素-γ（IFN-γ），这是一种具有多效性的 II 型干扰素，可通过激活巨噬细胞并促进 T 辅助细胞 1（Th1）极化来协调先天与适应性免疫反应。IFN-γ 主要通过 IFNGR1/IFNGR2 受体传导信号，进而激活 JAK1/JAK2 和 STAT1，诱导干扰素刺激基因的表达，从而增强抗原加工与递呈、抗微生物防御以及免疫调节性反馈。该细胞因子还与 NF-κB 和 IRF 驱动的转录程序发生交叉，影响趋化因子产生、MHC 表达以及细胞分化状态。IFN-γ 活性失衡与炎症和自身免疫性病理、宿主对病原体的易感性、肿瘤免疫监视以及神经炎症过程有关，因此 Ifng 是机制免疫学研究中的关键节点。

IFN-γ/Interferon gamma CRISPR激活质粒（m）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性Ifng的表达。

IFN-γ/Interferon gamma CRISPR激活质粒（m）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的Ifng基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于Ifng转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性IFN-γ/Interferon gamma表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的Ifng位点，并能够研究内源性位点上依赖于IFN-γ/Interferon gamma的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在Ifng表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟IFN-γ/Interferon gamma通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。