IFN-β Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-418564-ACT

O IFNB1 codifica o interferon‑β (IFN‑β) humano, um interferon do tipo I que é rapidamente induzido a jusante de receptores de reconhecimento de padrões que detetam ácidos nucleicos virais e citosólicos. O IFN‑β secretado ativa a sinalização JAK–STAT dependente de IFNAR para promover a transcrição de genes estimulados por interferon, moldando a defesa antiviral, a apresentação de antigénios e a comunicação entre a imunidade inata e adaptativa. O IFNB1 integra-se com os nós de sinalização IRF3/IRF7, NF‑κB e cGAS–STING/TBK1, que coordenam programas de genes inflamatórios e respostas ao stress celular. A desregulação da sinalização de IFN‑β está implicada em fenótipos autoinflamatórios e interferonopatias, e contribui para a remodelação imunitária na infeção crónica e na inflamação associada a tumores, tornando o IFNB1 um eixo amplamente utilizado em estudos mecanísticos de imunologia.

IFN-β O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IFNB1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IFN-β O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IFNB1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IFNB1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IFN-β. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IFNB1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IFN-β no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IFN-β em células tumorais com expressão de IFNB1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.