IFN-α4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421041

Panoramica

Ifna4 codifica l’interferone-α4 (IFN-α4), un interferone di tipo I prodotto in risposta agli acidi nucleici virali e ad altri segnali di attivazione dell’immunità innata. IFN-α4 si lega al complesso recettoriale IFNAR attivando la fosforilazione di STAT1/STAT2 dipendente da JAK1/TYK2 e la formazione del complesso trascrizionale ISGF3, inducendo geni stimolati dall’interferone che limitano la replicazione dei patogeni e modulano la presentazione dell’antigene. Questa segnalazione plasma il dialogo con le vie di NF-κB e degli IRF, influenzando programmi genici infiammatori, l’attivazione mieloide e il priming dell’immunità adattativa. Un’attività deregolata degli interferoni di tipo I è rilevante nella ricerca su infiammazione cronica e autoimmunità, così come nei modelli di interazione ospite–patogeno in cui il “tono” interferonico condiziona la suscettibilità alla malattia e la patologia tissutale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO IFN-α4 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ifna4 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ifna4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ifna4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina IFN-α4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ifna4 per lo studio della segnalazione di IFN-α4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ifna4 critici per la funzione di IFN-α4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ifna4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal IFN-α4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal IFN-α4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ifna4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal IFN-α4 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR IFN-α4 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ifna4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ifna4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.