IFITM1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-416878-ACT

インターフェロン誘導性膜貫通タンパク質1（IFITM1）は、膜に関連する小型のインターフェロン刺激遺伝子であり、自然免疫シグナル伝達を調節するとともに、膜特性やエンドソーム輸送を変化させることで、多様なエンベロープウイルスの侵入および複製を制限します。IFITM1の発現は、I型／II型インターフェロン経路の下流でJAK–STATシグナル伝達を介して誘導され、細胞の抗ウイルス状態プログラムや免疫―上皮相互作用に寄与します。さらにIFITM1は、細胞接着、増殖、ストレス応答に関連する過程にも関与し、インターフェロンシグナルを、より広範な転写制御ネットワークおよび膜リモデリングネットワークへと結び付けます。IFITM1発現の調節異常は、炎症環境や複数のがんの文脈で報告されており、宿主―病原体相互作用や腫瘍関連インターフェロン応答の研究において、有用なマーカーおよび機能的ハブとなります。

IFITM1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性IFITM1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

IFITM1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における IFITM1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はIFITM1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性IFITM1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のIFITM1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるIFITM1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびIFITM1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるIFITM1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。