IFIT5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-406044-ACT

IFIT5 humano (proteína induzida por interferon com repetições tetratricopeptídicas 5) é um produto de gene estimulado por interferon que participa da defesa imune inata ao se ligar a espécies de RNA, com preferência por RNA viral 5′ trifosforilado, e ao modular a sinalização antiviral a jusante. IFIT5 contribui para as respostas de interferon do tipo I e modula processos de vigilância de RNA que influenciam a tradução celular e programas de expressão gênica inflamatória. Por meio dessas atividades, IFIT5 é comumente estudada no contexto de interações hospedeiro–patógeno e de estados conduzidos por interferon, incluindo inflamação crônica e sinalização imune associada a tumores. A expressão alterada de IFIT5 tem sido associada a mudanças em redes de citocinas e em fenótipos do metabolismo de RNA relevantes para estudos mecanísticos de desregulação imune.

IFIT5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IFIT5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IFIT5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IFIT5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IFIT5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IFIT5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IFIT5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IFIT5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IFIT5 em células tumorais com expressão de IFIT5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.