IFIT1 Double Nickaseプラスミド (m): sc-421035-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- IFIT1 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- IFIT1ダブルニカースプラスミド（m）およびIFIT1ダブルニカースプラスミド（m2）は、Ifit1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
IFIT1 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-421035-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IFIT1 Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-421035-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
テトラトリコペプチドリピートを有するインターフェロン誘導タンパク質1（interferon-induced protein with tetratricopeptide repeats 1：IFIT1）は、マウスのIfit1遺伝子にコードされる、インターフェロン刺激によって誘導される主要なエフェクターの一つであり、不適切にキャップされたRNAや5′三リン酸RNAなどの「非自己」RNAの特徴を認識して翻訳開始を抑制することで、ウイルス複製を制限します。IFIT1は、I型インターフェロンおよびパターン認識受容体経路（RIG-I様受容体やTLRによる抗ウイルス応答など）の下流に位置する自然免疫シグナル伝達の中で機能し、感染や炎症の際の転写・翻訳環境を形成します。Ifit1発現やIFITファミリーの活性の変化は、インターフェロンシグネチャーの破綻、ウイルス病原体に対する宿主感受性、免疫介在性病態と関連づけられており、マウスモデルにおけるインターフェロン依存性遺伝子プログラムを解析する上で有用な結節点となります。研究者は、サイトカイン誘導性ストレス応答、マクロファージおよび樹状細胞の活性化、抗原提示や免疫細胞間クロストークの調節といった文脈でIFIT1を解析することが一般的です。
IFIT1 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Ifit1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Ifit1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Ifit1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Ifit1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。