IFIT1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403066-ACT

A proteína induzida por interferon com repetições tetratricopeptídicas 1 (IFIT1) é um produto gênico estimulado por interferon que se liga a RNAs virais e a RNAs com “cap” anômalo, incluindo estruturas 5′-trifosfato e cap0, para restringir a tradução e amplificar as defesas imunes inatas. A IFIT1 atua na sinalização de interferon dos tipos I/III a jusante da ativação de JAK–STAT, integrando-se a vias de receptores de reconhecimento de padrões, como RIG-I/MDA5 e TLR3, para moldar o estado antiviral. Por meio de interações com a maquinaria de iniciação da tradução e com outros membros da família IFIT, ela modula o metabolismo de RNA e programas de síntese proteica durante a ativação imune. A expressão desregulada de IFIT1 tem sido associada a respostas antivirais alteradas e a assinaturas transcricionais inflamatórias observadas em infecções, interferonopatias e microambientes tumorais-imunes, tornando-a um marcador útil e um nó mecanístico para pesquisas em imunologia e virologia.

IFIT1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IFIT1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IFIT1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IFIT1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IFIT1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IFIT1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IFIT1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IFIT1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IFIT1 em células tumorais com expressão de IFIT1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.