IFIT1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403066-ACT

テトラトリコペプチドリピートを有するインターフェロン誘導タンパク質1（IFIT1）は、インターフェロン刺激遺伝子（ISG）産物であり、5′三リン酸やcap0構造を含むウイルス由来および異常キャップRNAに結合して翻訳を抑制し、自然免疫防御を増強します。IFIT1は、JAK–STAT活性化の下流にあるI型／III型インターフェロンシグナル伝達の中で機能し、RIG-I/MDA5やTLR3などのパターン認識受容体経路と連携して抗ウイルス状態を形成します。翻訳開始装置や他のIFITファミリー分子との相互作用を介して、免疫活性化時のRNA代謝およびタンパク質合成プログラムを調節します。IFIT1発現の制御異常は、感染症、インターフェロノパチー、腫瘍免疫微小環境で観察される抗ウイルス応答の変化や炎症性転写シグネチャーと関連しており、免疫学・ウイルス学研究における有用なマーカーであるとともに、機構解明上の重要な結節点となっています。

IFIT1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性IFIT1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

IFIT1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における IFIT1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はIFIT1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性IFIT1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のIFIT1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるIFIT1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびIFIT1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるIFIT1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。