IFI-44 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405329-ACT

A IFI44 humana (proteína 44 induzida por interferão; IFI-44) é um gene estimulado por interferão, induzido a jusante da sinalização por interferões de tipo I e tipo III, integrando sinais de vias de recetores de reconhecimento de padrões, como os recetores do tipo RIG-I e o eixo cGAS–STING. A expressão de IFI-44 é frequentemente usada como leitura (readout) de programas transcricionais antivirais mediados por JAK–STAT e de uma ativação mais ampla da imunidade inata. Níveis desregulados de IFI44 têm sido reportados em contextos inflamatórios e autoimunes e em assinaturas transcricionais associadas a infeções, ligando-a a uma biologia do interferão relevante para a doença. Em investigação, a IFI44 serve como um “marcador” molecular para examinar a amplitude da resposta ao interferão, a conectividade de redes da imunidade inata e a regulação génica responsiva ao stress.

IFI-44 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IFI44 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IFI-44 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IFI44 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IFI44, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IFI-44. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IFI44 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IFI-44 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IFI-44 em células tumorais com expressão de IFI44 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.