IFI-27 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-416981-ACT

A proteína 27 induzível por interferon alfa (IFI27; IFI-27) é um pequeno produto gênico estimulado por interferon que se localiza predominantemente em membranas intracelulares, incluindo as mitocôndrias, e é induzida a jusante da sinalização de interferon do tipo I. A IFI27 participa de programas de imunidade inata associados a respostas antivirais, sinalização de estresse celular e modulação da suscetibilidade à apoptose, frequentemente acompanhando estados transcricionais ricos em ISGs. Alterações na expressão de IFI27 foram relatadas em diferentes contextos inflamatórios e em múltiplas assinaturas transcriptômicas de câncer, nas quais podem correlacionar-se com ativação imune, remodelamento epitelial e vias de interferon associadas à doença. Essas propriedades tornam a IFI27 um marcador útil e um nó funcional para dissecar fenótipos dirigidos por interferon, respostas ao estresse mitocondrial e interações imune–tumor em modelos de células humanas.

IFI-27 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IFI27 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IFI-27 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IFI27 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IFI27, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IFI-27. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IFI27 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IFI-27 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IFI-27 em células tumorais com expressão de IFI27 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.