IDO CRISPR Activationプラスミド (m): sc-421024-ACT

マウス Ido1 は、インドールアミン 2,3-ジオキシゲナーゼ（IDO）をコードする。IDO はヘム依存性酵素であり、キヌレニン経路に沿ったトリプトファン分解の最初の、かつ律速段階を触媒する。局所のトリプトファン利用可能性を調節し、生理活性をもつキヌレニン代謝産物を産生することで、IDO は免疫細胞の活性化、抗原提示、ならびに炎症性シグナル伝達プログラムに影響を与える。これには、芳香族炭化水素受容体（AHR）の活性や細胞ストレス応答に関連する経路も含まれる。Ido1 の発現は、インターフェロンγやその他の炎症性刺激によって誘導されることが多く、免疫寛容や組織恒常性の機構と結び付いている。IDO 活性の制御異常は、腫瘍における免疫回避、慢性感染に伴う炎症、自己免疫に関連した免疫調節、ならびに神経炎症過程と関連付けられており、免疫代謝研究における有用な標的（ノード）となっている。

IDO CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Ido1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

IDO CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Ido1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はIdo1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性IDOの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のIdo1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるIDO依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびIdo1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるIDO経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。