IDH3G Double Nickaseプラスミド (h): sc-404994-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- IDH3G Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- IDH3Gダブルニカースプラスミド（h）およびIDH3Gダブルニカースプラスミド（h2）は、IDH3Gを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: IDH3G 抗体 (C-5): sc-365489
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
IDH3G Double Nickaseプラスミド (h) | sc-404994-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IDH3G Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-404994-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
IDH3Gは、ミトコンドリアに存在するNAD依存性イソクエン酸デヒドロゲナーゼ3（IDH3）のγサブユニットをコードします。IDH3はトリカルボン酸（TCA）回路の主要酵素であり、イソクエン酸をα-ケトグルタル酸へ酸化的脱炭酸する反応を触媒すると同時に、酸化的リン酸化に用いられるNADHを産生します。ミトコンドリアの酸化還元バランスや中核代謝における炭素フラックスに影響を与えることで、IDH3Gはエネルギー恒常性、アナプレロシス（中間体補充）、および生合成前駆体の供給に寄与します。IDH3複合体の機能変調は、代謝制御の破綻やミトコンドリア呼吸の変化と関連づけられており、これらは増殖性細胞状態やストレス適応した細胞状態でしばしば再編成される過程です。ミトコンドリア代謝の結節点として、IDH3Gは生体エネルギー代謝、活性酸素種（ROS）の制御、ならびに多様な疾患関連表現型に関わる代謝リプログラミングの文脈で研究されています。
IDH3G ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における IDH3G 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、IDH3G内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、IDH3Gの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、IDH3Gが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。