ICK CRISPR Activationプラスミド (h): sc-406371-ACT

腸管細胞キナーゼ（ICK）は、一次繊毛および核に局在するセリン／スレオニン系プロテインキナーゼであり、細胞周期の進行、繊毛形成（ciliogenesis）、ならびに微小管依存性プロセスを制御する。ヒト細胞では、ICKは繊毛機能や発生パターニングに関連するシグナル伝達ネットワークに寄与しており、Hedgehogシグナル伝達や中心体動態と交差する経路も含まれる。ICKの活性または発現の攪乱は、繊毛病（ciliopathy）関連の表現型や発生異常と関連し、増殖と繊毛を介したシグナル伝達の協調におけるICKの役割と整合する。さらにICKは、キナーゼシグナル伝達や繊毛制御の変化が分化状態や細胞の適応度に影響する状況においても研究されている。

ICK CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ICKの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ICK CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ICK 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はICK転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ICKの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のICK遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるICK依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびICK発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるICK経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。