I1PP2A Double Nickaseプラスミド (h): sc-402988-NIC

ANP32AはI1PP2Aをコードしており、I1PP2Aは酸性でロイシンに富む核内リン酸化タンパク質として、プロテインホスファターゼ2A（PP2A）の阻害因子であるとともに、クロマチン関連プロセスの制御因子として機能します。PP2A依存的な脱リン酸化イベントを調節することで、I1PP2Aは細胞周期の進行、DNA損傷応答、ならびに転写制御と細胞ストレス適応を統合するシグナル伝達の要所に影響を与えます。ANP32Aはまた、RNA結合因子やクロマチンリモデリング因子との相互作用を介して、mRNA代謝および核—細胞質ダイナミクスにも関与します。ANP32A/I1PP2A活性の破綻は、増殖や生存に関わる表現型の変化と関連することが文献で報告されており、がん原性シグナル伝達や神経変性経路の研究における重要性を示しています。

ANP32A ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ANP32A 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ANP32A内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ANP32Aの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ANP32Aが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。