I1PP2A Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402988-ACT

ANP32A codifica a I1PP2A, uma fosfoproteína nuclear ácida rica em leucina que atua como inibidora da proteína fosfatase 2A (PP2A), moldando a sinalização dependente de fosforilação e processos associados à cromatina. Ao modular a atividade da PP2A, a I1PP2A influencia a progressão do ciclo celular, as respostas a danos no DNA, programas transcricionais e redes de sinalização adaptativas ao estresse. A ANP32A tem sido relacionada à regulação da apoptose e de respostas imunes inatas, sendo frequentemente estudada em contextos nos quais o controle aberrante de fosfatases altera a homeostase celular. A expressão ou função desregulada de ANP32A/I1PP2A tem sido associada à biologia tumoral, a mecanismos neurodegenerativos e à sinalização inflamatória, reforçando sua relevância em modelos de doença centrados em vias.

ANP32A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ANP32A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ANP32A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ANP32A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ANP32A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ANP32A. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ANP32A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ANP32A no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ANP32A em células tumorais com expressão de ANP32A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.