I-FABP Double Nickaseプラスミド (h): sc-416794-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- I-FABP Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- I-FABPダブルニカースプラスミド（h）およびI-FABPダブルニカースプラスミド（h2）は、FABP2を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: I-FABP 抗体 (E-9): sc-374482
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
I-FABP Double Nickaseプラスミド (h) | sc-416794-NIC | 20 µg | $410.00 |
脂肪酸結合タンパク質2（FABP2）は、腸管脂肪酸結合タンパク質（I-FABP）をコードしており、I-FABPは小腸の腸上皮細胞（エンテロサイト）に高発現する細胞質内の脂質シャペロンです。I-FABPは長鎖脂肪酸やその他の疎水性リガンドに結合し、β酸化、トリグリセリド合成、膜リモデリングへ向かう細胞内輸送を促進することで、栄養吸収と脂質恒常性を調整する経路と関連づけられています。食事由来脂質の取り扱いと上皮の代謝バランス維持に関わることから、FABP2は腸管バリア生理、炎症に伴う上皮ストレス、代謝性疾患に関連した脂質調節異常といった文脈でしばしば研究対象となります。実験系では、FABP2の活性や発現の変化が、エンテロサイト損傷や腸管透過性の破綻を示す分子指標として用いられてきました。
I-FABP ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における FABP2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、FABP2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、FABP2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、FABP2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。