HYPE Double Nickaseプラスミド (h): sc-406626-NIC

FICD は HYPE をコードしており、HYPE は小胞体（ER）に局在する Fic ドメイン酵素として、標的タンパク質の AMPylation（AMP 付加）および de-AMPylation（脱 AMP 化）を触媒します。なかでも代表的な標的は HSPA5/GRP78 シャペロンです。HYPE は GRP78 の活性を調節することで、プロテオスタシス、アンフォールドタンパク質応答（UPR）シグナル伝達、ならびに ER ストレスへの適応に影響し、タンパク質フォールディングと品質管理を協調させる経路群と統合的に機能します。FICD/HYPE 活性に関連する ER 恒常性およびストレスシグナルの破綻は、神経変性、代謝異常、がん生物学などの文脈における細胞の脆弱性と関連づけられており、ストレス応答性シグナルネットワークの機構解析研究において重要な対象となります。

HYPE ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における FICD 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、FICD内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、FICDの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、FICDが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。