HuR/ELAV1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400141-ACT

ELAVL1（HuR）は、広く発現しているRNA結合タンパク質で、3′UTRに存在するAUリッチエレメントを認識して標的mRNAを安定化し、翻訳を調節します。転写後の遺伝子発現制御を協調的に担うことで、HuRは細胞周期の進行、ストレス顆粒の動態、DNA損傷応答、ならびにNF-κBやMAPKに連動したプログラムを含む炎症シグナル伝達に影響を与えます。核と細胞質の間をシャトルするHuRは、酸化ストレスやサイトカインシグナルからの刺激を統合し、トランスクリプトームの出力を組み替えます。ELAVL1活性の破綻（異常）は、複数の疾患関連の細胞コンテキストにおいて、アポトーシス、細胞老化、そして腫瘍促進的な遺伝子発現ネットワークの制御異常と関連づけられています。

HuR/ELAV1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ELAVL1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HuR/ELAV1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ELAVL1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はELAVL1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HuR/ELAV1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のELAVL1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHuR/ELAV1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびELAVL1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHuR/ELAV1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。