HuC CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400172-ACT

ELAVL3（HuC）はニューロンに豊富に発現するRNA結合タンパク質で、標的転写産物中のAUリッチエレメント（ARE）を認識し、mRNAの安定性、スプライシング、翻訳を調節することで、神経細胞の分化および維持を支えます。転写後レベルでの遺伝子発現プログラムを形成することにより、HuCはRNA代謝の協調的な制御を介して、神経新生、神経突起の伸長、シナプス機能に寄与します。ELAVL3の発現量や細胞内局在の異常は神経細胞の恒常性を乱し得るため、神経発達疾患および神経変性疾患の生物学的文脈において研究されています。細胞分裂を終えた（ポストミトティック）ニューロンのマーカーとして、HuCはヒト細胞モデルにおける系譜決定やニューロン状態の変化を解析する際に広く用いられています。

HuC CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ELAVL3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HuC CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ELAVL3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はELAVL3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HuCの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のELAVL3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHuC依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびELAVL3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHuC経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。